乌兹别克族有自己的语言文字。其语言属于阿尔泰语系突厥语族西匈语支，与维吾尔语、塔塔尔语十分接近。乌孜别克文是一种以阿拉伯字母为基础的拼音文字。现新疆乌兹别克族基本通用维吾尔文或哈萨克文。 乌兹别克族口头文学非常丰富。民间文学在乌兹别克族文学中占有重要地位。乌兹别克族的民间文学包括谚语、格言、传说、故事、民歌和叙事长诗等。

乌兹别克族一日三餐。用餐时，长者居上座，幼者居下座。许多食物可用手抓食。现代乌兹别克族人吃饭大都改用筷子和匙子，但有些妇女和孩子，尤其在牧区，仍以手抓食。

乌兹别克族很早就信仰伊斯兰教。 自从十八世纪越来越多的乌兹别克族定居新疆以后，在喀什、莎车、伊犁、奇台等地由乌兹别克族民众捐献建造了一些较大的清真寺。各类宗教职业者是伊斯兰教活动具体执行者和组织者，如阿訇、毛拉、卡孜、阿拉木、伊玛木、买曾等。

乌兹别克族保存大量乌孜别克文字的文学作品，流传较多的是叙事长诗、寓言、谚语、格言、传说、故事、民歌等。 《阿勒帕米什》是流传广、影响大，有口皆碑的英雄史诗。 《坟墓中出生的孩子》是一首广大乌兹别克族人喜闻乐见的叙事长诗。 《母驼和羔羊》，《猴子和木匠》，《乌龟和蝎子》是乌兹别克族最为著名的寓言诗。这些诗都善用比喻，引用谚语明辨是非，在轻松愉快中阐明哲理。

乌兹别克葬礼与其他伊斯兰教民族大致相同，实行土葬。人死后，马上通知所有亲友。尸体停留时间很短，一般是早亡午葬或午亡晨葬。参加葬礼的男子都在腰间束一条白带，头戴帽子；妇女则在头上缠一条白布(或围白色头巾)。葬前要净身，如死者是男性，由男性净体；若是女性则由女性净体；然后用白布裹尸。阿訇为死者诵经时，妇女围尸哭泣，男子则在户外。出殡时，将尸体放于长形木匣里，抬往清真寺，由阿訇祝福，然后抬往墓地。

乌兹别克族的天文学知识源远流长。喀喇汗王朝时期的哈斯·哈吉甫在其《福乐智慧》一书中介绍了当时的许多天文学知识，并在第五章《论七曜和黄道十二宫》中以诗歌的形式描述了七曜和黄道十二宫。作者介绍了七曜的名称、特性、位置及其出现的时间，并根据“地球中心说”列出了行星在太阳系中的排列顺序，画出了七曜星图。所谓黄道十二宫，即十二个星座，把天空中一年四季出现的可以观察到的星群分为12组。

乌兹别克族主要节日有“圣纪节”、“肉孜节”、“古尔邦节”等。 传统节日与当地其他信奉伊斯兰教民族的节日基本相同，以肉孜节和古尔邦节为一年之中最隆重的节日。过“肉孜节”前的斋月里成年人都要封斋，吃斋饭时，亲友邻里要互相邀请，如有客至，主人要热情款待。

南疆气候干燥温和，降水量小，乌兹别克族居住的房子一般为平顶而稍有倾斜的长方形的土房，自成庭院。这种土木结构的房屋墙很厚，冬暖夏凉。许多房子用土围墙搭成，这种围墙被称为安集延墙，乌孜别克人则称之为滑稽泥墙。这是一种用栅栏将土坯连接固定成一个整体的建筑物，稳定性强，适合在沙漠或沼泽地中建造。房顶可堆放什物或晒制干果，夏季则可纳凉。

乌兹别克族实行一夫一妻制婚姻，主要是在本民族内部进行，姑表、姨表和堂兄妹之间可以通婚，也允许与信仰伊斯兰教的外族人通婚。过去，乌兹别克族婚姻大多由父母包办。一般都实行早婚，男子十七八岁即可娶妻，女子十四五岁就必须出嫁。子女没有恋爱自由。父母在为女儿择婿时，比较注重男方的经济状况、社会地位、道德品质、年龄及外貌长相等。有时候，当父母准备为子女确定婚姻关系时，事先告知子女。

乌兹别克族是一个具有悠久历史的民族，能歌善舞，舞蹈在传统的生活中占有相当重要的地位。在节日或娱乐活动中，男女老幼，无拘无束，尽情歌舞。乌兹别克族舞蹈，舞步轻盈、身腰柔软、双臂优美、节奏明快。表演形式很多，有男、女单人舞，单人独舞，也有双人舞和集体舞。

乌兹别克族的服装以男女都带各式各样的小帽为特点。 早在公元6世纪至7世纪之前，中亚农业居民已开始穿着用丝绸、毛织品缝制的各类服饰，不仅刺绣精美，色彩艳丽，而且图案多变，颇具匠心。